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服務介紹:
用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法;用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術,因為熒光色素不但能與抗體球蛋白結合,用于檢測或定位各種抗原,也可以與其他蛋白質結合,用于檢測或定位抗體,但是在實際工作中熒光抗原技術很少應用,所以人們習慣稱為熒光抗體技術,或稱為免疫熒光技術。以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內抗原或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞(或組織)化學技術。
該技術的主要特點是:特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是:非特異性染色問題尚未完全解決,結果判定的客觀性不足,技術程序也還比較復雜。
熒光免疫法按反應體系及定量方法不同,還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比,熒光免疫法無放射性污染,并且大多操作簡便,便于推廣。國外生產的TDM用試劑盒,有相當一部分即屬于此類,并且還有專供TDM熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生產。
技術原理:
免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性,所以當抗原抗體發(fā)生反應時,只要知道其中的一個因素,就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應的抗原(或抗體)結合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應。
實驗步驟:
實驗結果展示:
常見問題:
無/弱染色?
烤片溫度過高,推薦56℃-60℃1-2h;
一抗是否適用固定液和石蠟切片,使用濃度是否過低,孵育是否時間過短等。
非特異性背景染色?
是否滅活內源性過氧化物酶;
孵育過程中干片;
抗原熱修復過度。
染色過深?
一抗?jié)舛冗^高;
染色試濃度過高或孵育時間過長;
染色劑濃度過高或孵育時間過長
送樣運輸要求:
1、冰凍切片-20℃保存和運輸;
2、石蠟切片常溫運輸至實驗室;
3、細胞爬片用固定液浸泡,4℃保存和運輸。